Güncel Patoloji Dergisi
2018, Cilt 2, Ek Sayı
PL057(571) - Renal Hücreli Karsinomlarda PCR ve İmmünohistokimyasal Yöntem ile PD-L1 Ekspresyonunun Araştırılması
Nefropatoloji
1 Akdeniz Üniversitesi Tıbbi Patoloji Anabilim Dalı
2 Akdeniz Üniversitesi Üroloji Anabilim Dalı
AMAÇ
Renal hücreli karsinom (RHK), immünojenik bir tümör olup konak antitümör immünitesinin gelişimini engelleyici özellikleri mevcuttur. Bu nedenle metastatik renal hücreli karsinomlar PD1/PD-L1 inhibitörleri tedavisi için olası bir hedef haline gelmiştir. Çalışmamızda immünohistokimyasal yöntem ve gerçek zamanlı kantitiatif PCR (polimeraz zincir reaksiyonu) yöntemi ile belirlenen PD-L1 ekspresyon durumlarının, hastaların metastaz durumu, evre ve sağkalım gibi prognostik parametreleriyle korelasyon ilişkisinin saptanması ile literatüre katkıda bulunmak amaçlanmıştır. Ayrıca PD-L1 ekspresyonunun belirlenmesinde uygun yöntem seçimini değerlendirerek PD1/PD-L1 inhibitörü tedavisine aday hastaların seçiminde yol göstermek amaçlanmıştır.
GEREÇ VE YÖNTEM
Çalışmamızda Akdeniz Üniversitesi Hastanesinde 2008-2013 yılları arasında renal hücreli karsinom tanısı ile radikal nefrektomi uygulanmış 81 hastanın parafin bloklarından alınan kesitlerin PD-L1 ekspresyon durumları, immünohistokimyasal Anti PD-L1 antikoru (28-8 klonu) ve kantitatif gerçek zamanlı PCR yöntemleri ile belirlenmiştir. PCR ile PD-L1 gen ekspresyonu varlığını belirlenmesinde RNA izolasyonu, komplementer DNA dönüşümü ve gerçek zamanlı PCR reaksiyonu hazırlanması basamakları uygulanmıştır. Bu reaksiyonda, olguların PD-L1 ekspresyonu eğrileri, kontrol insan PPIA referans geni ile karşılaştırılarak ekspresyon var veya yok şeklinde değerlendirilmiştir. İstatistiksel inceleme PCR sonuçları üzerinden uygulanmış olup p<0,05 değeri anlamlı kabul edilmiştir.
BULGULAR
Çalışmamızda PD-L1 ekspresyonu berrrak hücreli, kromofob hücreli ve papiller RHK alt tiplerini içeren hasta grubunda %19,75 oranında izlenmiş olup, prognostik parametrelerden sadece tanı anında uzak metastaz görülme durumu ile istatistiksel olarak sınırda ilişki (p=0,054) bulunmuştur. Diğer klinik ve prognostik parametreler ile PD-L1 ekspresyonu arasında istatistiksel olarak anlamlı ilişki izlenmemiştir. Çalışmamızda gerçek zamanlı kantitatif PCR ile PD-L1 gen ekspresyonu pozitif olarak belirlenen 16 hastanın 3ünde İHK'sal PD-L1 ekspresyonu izlenmiştir.
SONUÇ
Elde ettiğimiz sonuçlarda PD-L1 ekspresyonunun prognostik faktörlerle istatistiksel olarak anlamlı ilişkisi tespit edilemese de PD1/PD-L1 inhibitörü tedavisine aday metastatik hastaların seçiminde yardımcı diyagnostik test olarak kullanılabileceğini düşünmekteyiz. PD-L1 İHK'sal boyanmasının, materyal yaşının 3 seneyi geçmiş olması, formalinle fikse olmuş parafine gömülü doku örneklerinde çalışılması, fiksasyon ve takip problemleri olması durumunda doğru sonuçları yanstmayacağının göz önünde bulundurulması önemlidir. Bu nedenlerle literatürdeki İHK'sal boyanma ve skorlama farklılıklarını ortadan kaldırıp kantitatif verilerle standardizasyonun sağlanması amacıyla PD-L1 ekspresyonunu belirlemede İHK'sal ve PCR yönteminin birlikte kullanımını önermekteyiz. Anahtar Kelimeler : Renal hücreli karsinom, PD-L1, immünohistokimya, PCR
2 Akdeniz Üniversitesi Üroloji Anabilim Dalı
AMAÇ
Renal hücreli karsinom (RHK), immünojenik bir tümör olup konak antitümör immünitesinin gelişimini engelleyici özellikleri mevcuttur. Bu nedenle metastatik renal hücreli karsinomlar PD1/PD-L1 inhibitörleri tedavisi için olası bir hedef haline gelmiştir. Çalışmamızda immünohistokimyasal yöntem ve gerçek zamanlı kantitiatif PCR (polimeraz zincir reaksiyonu) yöntemi ile belirlenen PD-L1 ekspresyon durumlarının, hastaların metastaz durumu, evre ve sağkalım gibi prognostik parametreleriyle korelasyon ilişkisinin saptanması ile literatüre katkıda bulunmak amaçlanmıştır. Ayrıca PD-L1 ekspresyonunun belirlenmesinde uygun yöntem seçimini değerlendirerek PD1/PD-L1 inhibitörü tedavisine aday hastaların seçiminde yol göstermek amaçlanmıştır.
GEREÇ VE YÖNTEM
Çalışmamızda Akdeniz Üniversitesi Hastanesinde 2008-2013 yılları arasında renal hücreli karsinom tanısı ile radikal nefrektomi uygulanmış 81 hastanın parafin bloklarından alınan kesitlerin PD-L1 ekspresyon durumları, immünohistokimyasal Anti PD-L1 antikoru (28-8 klonu) ve kantitatif gerçek zamanlı PCR yöntemleri ile belirlenmiştir. PCR ile PD-L1 gen ekspresyonu varlığını belirlenmesinde RNA izolasyonu, komplementer DNA dönüşümü ve gerçek zamanlı PCR reaksiyonu hazırlanması basamakları uygulanmıştır. Bu reaksiyonda, olguların PD-L1 ekspresyonu eğrileri, kontrol insan PPIA referans geni ile karşılaştırılarak ekspresyon var veya yok şeklinde değerlendirilmiştir. İstatistiksel inceleme PCR sonuçları üzerinden uygulanmış olup p<0,05 değeri anlamlı kabul edilmiştir.
BULGULAR
Çalışmamızda PD-L1 ekspresyonu berrrak hücreli, kromofob hücreli ve papiller RHK alt tiplerini içeren hasta grubunda %19,75 oranında izlenmiş olup, prognostik parametrelerden sadece tanı anında uzak metastaz görülme durumu ile istatistiksel olarak sınırda ilişki (p=0,054) bulunmuştur. Diğer klinik ve prognostik parametreler ile PD-L1 ekspresyonu arasında istatistiksel olarak anlamlı ilişki izlenmemiştir. Çalışmamızda gerçek zamanlı kantitatif PCR ile PD-L1 gen ekspresyonu pozitif olarak belirlenen 16 hastanın 3ünde İHK'sal PD-L1 ekspresyonu izlenmiştir.
SONUÇ
Elde ettiğimiz sonuçlarda PD-L1 ekspresyonunun prognostik faktörlerle istatistiksel olarak anlamlı ilişkisi tespit edilemese de PD1/PD-L1 inhibitörü tedavisine aday metastatik hastaların seçiminde yardımcı diyagnostik test olarak kullanılabileceğini düşünmekteyiz. PD-L1 İHK'sal boyanmasının, materyal yaşının 3 seneyi geçmiş olması, formalinle fikse olmuş parafine gömülü doku örneklerinde çalışılması, fiksasyon ve takip problemleri olması durumunda doğru sonuçları yanstmayacağının göz önünde bulundurulması önemlidir. Bu nedenlerle literatürdeki İHK'sal boyanma ve skorlama farklılıklarını ortadan kaldırıp kantitatif verilerle standardizasyonun sağlanması amacıyla PD-L1 ekspresyonunu belirlemede İHK'sal ve PCR yönteminin birlikte kullanımını önermekteyiz. Anahtar Kelimeler : Renal hücreli karsinom, PD-L1, immünohistokimya, PCR